背景:
O-糖蛋白酶(O-Glycoprotease)序列來自Akkermansia muciniphila,重組表達于E.coli,C端帶6×His标簽。O-糖蛋白酶是一種O-糖蛋白特異性内切蛋白酶,可(kě)催化天然黏蛋白型O-糖基化蛋白中(zhōng)與O-聚體(tǐ)直接相鄰的肽鍵的水解。
O-糖蛋白酶作(zuò)為(wèi)内切蛋白酶,高度特異性地在絲氨酸或蘇氨酸的O-聚糖N端消化蛋白質(zhì)。這就産(chǎn)生了N端攜帶O-糖鏈的糖肽,并使O-糖鏈分(fēn)析、O-糖鏈定位和O-聚糖位點測定成為(wèi)可(kě)能(néng)。
産(chǎn)品包裝(zhuāng):
Rhinogen®O-糖蛋白酶(O-Glycoprotease)包裝(zhuāng)規格如下:
目錄号 |
規格 |
制劑 |
QIP-008 |
2000U |
凍幹于20mM TBS,pH7.6中(zhōng),不添加防腐劑 |
配套試劑:
配套提供的Rhinogen® α2-3,6,8,9 Neuraminidase(EDTA-free)包裝(zhuāng)規格如下:
目錄号 |
規格 |
制劑 |
QPF-012 |
0.6U/30μl |
50mM NaCl,20mM Tris-HCl(pH7.5 at 25°C) |
配套提供的試劑如下:
目錄号 |
試劑 |
成分(fēn) |
EB10 |
10×Glyco緩沖液3 |
200mM Tris,pH6.8 |
産(chǎn)品來源:
Rhinogen® O-糖蛋白酶序列來源于Akkermansia muciniphila,重組表達于E. coli,理(lǐ)論分(fēn)子量約42KD,C端帶6×His标簽。
産(chǎn)品質(zhì)量:
1. 高穩定性:每批産(chǎn)品都經過嚴格的質(zhì)量控制,以實現産(chǎn)品批間穩定性;
2. 高純度:通過SDS-PAGE檢測,O-糖蛋白酶純度≥90%,α2-3,6,8,9 Neuraminidase純度≥95%。
産(chǎn)品特性:
O-糖蛋白酶(O-Glycoprotease)是一種O-糖蛋白特異性内切蛋白酶,可(kě)催化天然黏蛋白型O-糖基化蛋白中(zhōng)與O-聚體(tǐ)直接相鄰的肽鍵的水解,位點在O-糖基化絲氨酸和蘇氨酸殘基的N端。
酶活定義:
與α2-3,6,8,9Neuraminidase(EDTA-free)搭配使用(yòng),在20mM Tris-HCl,pH6.8條件下,37℃孵育2小(xiǎo)時,1單位酶(1U)可(kě)消化1μg糖蛋白(TNFR)的≥90%,通過SDS-PAGE确認。
儲存條件:
采用(yòng)冰袋運輸,長(cháng)期儲存請置于-20℃,重懸後2-8℃可(kě)保存1個月。避免反複多(duō)次凍融。
應用(yòng):
1. O-糖基化分(fēn)析;
2. O-聚糖譜;
3. O-聚糖位點測定。
已知的O-糖蛋白酶抑制劑有(yǒu)哪些?
O-糖蛋白酶是一種金屬蛋白酶,因此對螯合劑(如EDTA)高度敏感,濃度>5mM會導緻酶的完全抑制。ZnCl2也部分(fēn)抑制O-糖蛋白酶活性。
O-糖蛋白酶是否可(kě)以和唾液酸酶合用(yòng)?
是的,與唾液酸酶結合使用(yòng),可(kě)用(yòng)于去唾液酸化和消化O-糖基化蛋白質(zhì),提高O-糖蛋白酶酶切效率。
必須要去除唾液酸嗎?
在唾液酸存在下,O-糖蛋白酶的活性顯着降低,因此我們建議使用(yòng)唾液酸酶去除唾液酸。或對您的樣品嘗試使用(yòng)和不使用(yòng)唾液酸酶條件下對比消化,以評估您的特定樣品是否有(yǒu)必要去除唾液酸。
是否需要樣品處于天然折疊狀态?還是要進行變性處理(lǐ)?
如果消化不充分(fēn),可(kě)能(néng)是由于樣品的O-聚糖存在空間位阻,酶無法到達導緻的。在這種情況下,我們建議嘗試以下工(gōng)作(zuò)流程:還原、變性、羧甲基化、置換緩沖液,然後使用(yòng)O-糖蛋白酶和唾液酸酶進行消化。