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NuclecutTM 全能(néng)核酸酶
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  2. 規格
  3. 價格
RA-NC01-A
10KU
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RA-NC01-B
50KU
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RA-NC01-C
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産(chǎn)品概述

背景:  

       在生物(wù)制品的制備/生産(chǎn)過程中(zhōng),去除DNA殘留是極為(wèi)重要的。在過去幾年裏,重組蛋白類生物(wù)藥物(wù)的發展突飛猛進,并且在未來依然前景廣闊。在微生物(wù)系統中(zhōng),這些重組蛋白一般都是通過微生物(wù)的發酵,并且通過裂解微生物(wù)細胞而釋放出來。然而,在釋放出目标産(chǎn)物(wù)的同時,細胞裂解物(wù)會同時産(chǎn)生一些雜産(chǎn)物(wù),比如宿主細胞蛋白、核酸(DNA以及RNA)、細胞内毒素以及一些其他(tā)宿主細胞雜質(zhì)。重組蛋白藥物(wù)中(zhōng)的DNA殘留可(kě)能(néng)會給患者體(tǐ)内帶入激活的緻癌基因,或者作(zuò)為(wèi)潛在的感染病毒DNA緻使患者被感染。因此,DNA殘留量是重組蛋白藥物(wù)的一個重要的評價标準。世界上許多(duō)權威機構都對重組蛋白類藥物(wù)中(zhōng)的宿主DNA殘留量做出了嚴格的規定,對于每支疫苗中(zhōng)的DNA殘留量,WHO規定不可(kě)以超過l0ng,美國(guó)FDA規定不可(kě)以超過l0pg,我國(guó)規定為(wèi)l00pg以下。 

       NuclecutTM 全能(néng)核酸酶(SuperNuclease),是一種核酸内切酶,可(kě)将核酸降解成2~5個堿基的5'-單磷酸核苷酸,因其能(néng)高效降解任何形式(雙鏈,單鏈,線(xiàn)狀,環狀)的DNA和RNA而沒有(yǒu)蛋白裂解活性,因此被稱為(wèi)“全能(néng)核酸酶”。全能(néng)核酸酶能(néng)有(yǒu)效降低蛋白樣品粘度,去除蛋白樣品中(zhōng)核酸的污染,且無蛋白酶活性殘留,NuclecutTM 全能(néng)核酸酶活性達1×106U/mg蛋白。全能(néng)核酸酶在降低粘性的同時,也具(jù)有(yǒu)多(duō)種其他(tā)用(yòng)途,如:減少了樣品處理(lǐ)時間、增加了蛋白産(chǎn)量、離心時沉澱和上清分(fēn)離的更徹底、更便于溶液的離心(尤其是超濾)、提高色譜純化的效率等。

概述:

       該酶在0~42℃的均有(yǒu)活性,最适溫度為(wèi)37℃;有(yǒu)效的pH範圍為(wèi)6.0-10.0,最适pH為(wèi)8.0;發揮活性需要Mg2+存在,1-2mM為(wèi)最佳;在去污劑、SDS、尿素等存在下仍然保持一定活性。全能(néng)核酸酶可(kě)以非特異性裂解單鏈以及雙鏈的DNA和RNA,并切割出一個3'-OH和5'-磷酸基。

産(chǎn)品包裝(zhuāng):

       NuclecutTM 全能(néng)核酸酶(SuperNuclease)包裝(zhuāng)規格如下:

目錄号 規格
RA-NC01-A
10KU
RA-NC01-B
50KU
RA-NC01-C
500KU

       産(chǎn)品儲存于20mM Tris-HCI,pH8.0,2mM MgCl2,20mM NaCl和50%(v/v)甘油中(zhōng),不添加防腐劑。

産(chǎn)品來源

       NuclecutTM 全能(néng)核酸酶序列來源于Serratia marcescens,重組表達于E. coli,單體(tǐ)理(lǐ)論分(fēn)子量約27.5KD,C端帶6×His标簽。

産(chǎn)品特性

       NuclecutTM 全能(néng)核酸酶可(kě)非特異性降解所有(yǒu)形式的DNA和RNA(單鏈的、雙鏈的、線(xiàn)性的和環化的),将核酸完全消化為(wèi)長(cháng)度為(wèi)3至5個堿基的5'-單磷酸末端寡核苷酸。

産(chǎn)品質(zhì)量

       1. 高純度:通過SDS-PAGE檢測,純度≥90%;

       2. 高穩定性:每批産(chǎn)品都經過嚴格的質(zhì)量控制,以實現産(chǎn)品批間穩定性。

       3. 無蛋白酶活性:偶氮酪蛋白法分(fēn)析無蛋白酶活性。

      

儲存條件:

       采用(yòng)幹冰運輸,收到産(chǎn)品後請立即将其置于-20℃保存。複溶後可(kě)适當分(fēn)裝(zhuāng)以減少多(duō)次凍融帶來的活性損失。

應用(yòng):

       1. 從蛋白質(zhì)和其他(tā)生物(wù)制劑中(zhōng)去除DNA / RNA;

       2. 降低由核酸引起的粘度;

       3. 在二維凝膠電(diàn)泳和色譜中(zhōng)制備樣品;

       4. 防止細胞結塊;

       5. 降低哺乳動物(wù)細胞提取物(wù)的粘度;

       6. 降低大腸杆菌細胞裂解液的粘度以增強過濾性。

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常見問題

什麽樣的質(zhì)量/數量的酶對特定的應用(yòng)是足夠的? 
有(yǒu)幾個參數如溫度及酶切體(tǐ)系會影響酶的活性,因此最佳條件将因工(gōng)藝而異,需要通過實驗來确定。

實驗過程中(zhōng),需要在哪一步加入全能(néng)核酸酶?如果在低溫下進行酶切,需要添加多(duō)少全能(néng)核酸酶?
這取決于使用(yòng)全能(néng)核酸酶的目的,但一般情況下,酶的添加最好是在培養後和捕獲步驟之前。
在溫度低于37℃時,酶的效率降低,補償這種效率下降所需的量因過程而異,并取決于現有(yǒu)的其他(tā)參數。通常,增加另一個參數,如孵育時間,可(kě)以在不需要增加酶用(yòng)量的情況下進行補償。

為(wèi)什麽全能(néng)核酸酶作(zuò)用(yòng)後沒效果?什麽會抑制其活性?
全能(néng)核酸酶活性範圍較廣,而1-2mM Mg2+的濃度對全能(néng)核酸酶的活性至關重要。
Mn2+可(kě)以替代Mg2+;在Mg2+的存在下,酶活性達到最佳。一價陽離子濃度>300mM,磷酸鹽濃度>100mM,以及硫酸铵濃度>100 mM都會抑制約50%的活性。此外,>1mM EDTA濃度也會抑制全能(néng)核酸酶的活性。

酶活降低的原因是什麽?
全能(néng)核酸酶通常非常穩定,然而在極少數情況下,會導緻活性喪失。可(kě)能(néng)原因有(yǒu):
1)不可(kě)逆失活可(kě)能(néng)是由于樣品中(zhōng)存在變性劑,如蛋白酶;或者是存儲不當。
2)可(kě)逆失活通常是由于螯合劑的存在,如EDTA,它可(kě)以螯合去除活性必需的鎂離子。
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