背景:
報告基因檢測是基因表達調節研究的重要手段,目前已被廣泛應用(yòng)于分(fēn)子生物(wù)學(xué)及細胞生物(wù)學(xué)研究領域。報告基因檢測法是一種将轉錄調控和報告基因(如熒光素酶)偶聯表達,通過報告基因表達産(chǎn)物(wù)(如熒光素酶)活性的測定判斷細胞刺激物(wù)(如小(xiǎo)分(fēn)子化合物(wù)、重組蛋白)生物(wù)學(xué)活性的方法,《中(zhōng)國(guó)藥典》2015年版已将報告基因檢測方法列為(wèi)幹擾素活性測定法第二法(通則3523)。目前在生物(wù)制品PD1/PD-L1、IL6/IL6R等相關單抗藥物(wù)的生物(wù)學(xué)活性檢測和Fc效應功能(néng)研究中(zhōng),報告基因檢測法已經起到了至關重要的作(zuò)用(yòng)。以往隻能(néng)采用(yòng)體(tǐ)内動物(wù)學(xué)活性研究的細胞因子如EPO、GH、FSH、TSH等,也在逐步采取體(tǐ)外報告基因檢測法替代原有(yǒu)的動物(wù)體(tǐ)内法作(zuò)為(wèi)産(chǎn)品批放行的關鍵指标。轉錄調節與報告基因的表達相結合通常用(yòng)于廣泛的生理(lǐ)學(xué)研究,例如通過量化特定受體(tǐ)反應元件對基因表達的作(zuò)用(yòng)來分(fēn)析受體(tǐ)功能(néng),或者用(yòng)來進行信号轉導、轉錄因子、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作(zuò)用(yòng)和病毒感染和傳播的研究,轉錄下遊的事件,如mRNA加工(gōng)和蛋白質(zhì)折疊,也可(kě)以被分(fēn)析。因此,熒光素酶被廣泛應用(yòng)于生物(wù)技(jì )術和制藥行業。
概述:
螢火蟲熒光素酶(Firefly Luciferase)是一種分(fēn)子量為(wèi)61kDa的蛋白,因其在宿主細胞中(zhōng)無背景螢光,同時無需翻譯後修飾,檢測快速、可(kě)靠和方便,是應用(yòng)螢火蟲熒光素酶報告基因系統檢測的理(lǐ)想選擇。本試劑盒以D-熒光素(D-luciferin)為(wèi)底物(wù),在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下,可(kě)以被螢火蟲熒光素酶催化進行氧化脫羧反應,産(chǎn)生激活态的氧化熒光素(Oxyluciferin),并産(chǎn)生生物(wù)螢光(Bioluminescence)(圖1)。生物(wù)螢光與熒光素酶的啓動子活性成比例,間接反映了細胞刺激物(wù)的生物(wù)學(xué)活性。
圖 1. 螢火蟲熒光素酶底物(wù)的發光原理(lǐ)
産(chǎn)品特性:
室溫(22-25℃)下本産(chǎn)品的信号半衰期為(wèi)30分(fēn)鍾;Bio-BrightTM One-Step螢火蟲熒光素酶分(fēn)析試劑盒具(jù)有(yǒu)操作(zuò)簡便、試劑穩定、超高的光輸出、靈敏度高等特點。
産(chǎn)品規格:
本試劑盒包裝(zhuāng)規格如下表:
名(míng)稱 |
貨号 |
規格 |
Bio-BrightTM One-Step螢火蟲熒光素酶測定試劑盒 |
RA-GL07 |
50ml |
試劑盒組分(fēn): |
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• 熒光素酶反應底物(wù)(凍幹粉) |
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1Vial |
• 熒光素酶反應緩沖液 |
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50ml |
采用(yòng)冰袋運輸。收到試劑盒後,可(kě)在-30 ~ -15℃長(cháng)期保存。混合後的試劑,為(wèi)保證試劑出色的使用(yòng)性能(néng),未使用(yòng)完的試劑建議-70℃保存。