背景：

FabCOUPER protease是一種來自Bdellovibrio bacteriovorus的絲氨酸蛋白酶，重組表達于E.coli，C端帶6×His标簽。可(kě)在鉸鏈上方的單個位點特異性消化人IgG1，無需還原條件即可(kě)在兩小(xiǎo)時内産(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。

概述：

       FabCOUPER protease在鉸鏈上方的單個位點（...KSCDK/THTCPPCP...）消化人IgG1，生成完整的Fab和Fc片段。如果去除N-聚糖，則Fc上可(kě)能(néng)會出現第二個消化位點。FabCOUPER protease在天然條件下具(jù)有(yǒu)活性并且需要鈣離子的存在，但被Zn2+抑制，同時被絲氨酸蛋白酶抑制劑及EDTA抑制；最适溫度37℃，在22至30℃也顯示出活性。在pH7-8.5時獲得最佳活性。

包裝(zhuāng)規格：

Rhinogen^® FabCOUPER protease包裝(zhuāng)規格如下：

   産(chǎn)品儲存于50 mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA，pH7.6, 不添加防腐劑。

   配套提供的試劑如下：

産(chǎn)品來源：

       FabCOUPER protease序列來自Bdellovibrio bacteriovorus，重組表達于E. coli，理(lǐ)論分(fēn)子量約71.82KD。

産(chǎn)品特性：

       Rhinogen® FabCOUPER protease是一種蛋白酶，可(kě)在鉸鏈上方的單個位點特異性消化人IgG1，無需還原條件即可(kě)在兩小(xiǎo)時内産(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。該酶對具(jù)有(yǒu)突變鉸鏈區(qū)的抗體(tǐ)（例如LALA突變）具(jù)有(yǒu)活性。

酶活定義：

在50mMTris-HCl，150mM NaCl，10mM CaCl2，pH7.6條件下，37℃孵育2小(xiǎo)時，1單位酶（1U）可(kě)消化1µg人IgG1的≥90%，通過SDS-PAGE确認。

儲存條件：

1. 冷藏運輸，到達時應儲存在-70℃- -20℃條件下；

2. 由于FabCOUPER protease具(jù)有(yǒu)自降解活性，解凍後應保持低溫并盡量在的同一天使用(yòng)。同時可(kě)适當分(fēn)裝(zhuāng)後凍存，避免多(duō)次凍融。

應用(yòng)：

突變抗體(tǐ)和Fc融合蛋白消化及結構分(fēn)析。

使用(yòng)建議：

實驗準備：

1. 配制消化緩沖液：50mM Tris-HCl，150mM NaCl，pH7.6；

2. 使用(yòng)前，請将Rhinogen® FabCOUPER protease從-20℃取出解凍，瞬離備用(yòng)；

3. 将20×CaCl2從-20℃取出解凍，瞬離備用(yòng)。

操作(zuò)說明：

1. 使用(yòng)消化緩沖液将人IgG1調整至0.5-5.0mg/ml；

2. 按1U FabCOUPER protease/1μg人IgG1的比例進行消化，确保最終反應體(tǐ)系中(zhōng)含有(yǒu)10mM CaCl2；

3. 以消化100μg人IgG1（2mg/ml）為(wèi)例，将50μl人IgG1加入到EP管中(zhōng)，加入5μl FabCOUPER protease（20U/μl），加入5μl 20×CaCl2，加入40μl 消化緩沖液補足至100μl；

4. 輕柔混勻後瞬離，37℃條件下反應2小(xiǎo)時。

注意：1）根據底物(wù)的不同，可(kě)能(néng)需要優化酶的用(yòng)量和消化時間；

          2）反應可(kě)以線(xiàn)性放大或縮小(xiǎo)；

          3）酶液可(kě)以适當稀釋。