藥物(wù)的質(zhì)量控制包括生産(chǎn)過程以及終産(chǎn)品的質(zhì)量控制。重組蛋白藥物(wù)因其特殊的結構通常需要哺乳動物(wù)表達體(tǐ)系制備，但由于其來源和生産(chǎn)工(gōng)藝的特殊性，安(ān)全性需要額外關注。利用(yòng)哺乳動物(wù)生産(chǎn)藥物(wù)的過程包括工(gōng)程細胞的構建及傳代擴增、細胞培養、抗體(tǐ)純化和制劑。重組抗體(tǐ)藥物(wù)生産(chǎn)的質(zhì)量控制包括生産(chǎn)細胞的質(zhì)量控制和産(chǎn)品的質(zhì)量控制。

其中(zhōng)，細胞的質(zhì)量控制主要包括以下幾個方面：細胞鑒别、細菌和真菌檢測檢查、分(fēn)支杆菌檢查、支原體(tǐ)檢查、外源因子和内源因子的檢查、成瘤性/緻瘤性檢查等。細胞庫是整個生産(chǎn)過程的原材料，監管部門要求進行全面的檢測。下圖為(wèi)主細胞庫（MCB）的鑒定和檢測要求。

關于細胞庫檢定相應的法規如下

必須證明用(yòng)于生物(wù)制品生産(chǎn)的細胞基質(zhì)不含外源因子，包括支原體(tǐ)。支原體(tǐ)污染檢測必須在産(chǎn)品開發的各個階段進行，包括原材料、細胞庫（MCB+WCB+EOPC）、病毒種子庫、未加工(gōng)的收獲液和最終産(chǎn)品。

美國(guó)藥典＜USP＞63中(zhōng)指出需要用(yòng)兩種方法檢測支原體(tǐ)污染：（A）瓊脂－肉湯培養法（B）指示細胞法。并提到經驗證的核酸擴增方法（NAT）或酶學(xué)方法可(kě)以用(yòng)于檢測支原體(tǐ)，但前提是該方法經驗證可(kě)與培養法和指示細胞法等效。

歐洲藥典EP2.6.7中(zhōng)也要求培養法和指示細胞法同時檢測，并且更詳細地介紹了NAT方法代替前1或2種方法的具(jù)體(tǐ)驗證要求。直接NAT法可(kě)以在有(yǒu)細胞毒性的材料中(zhōng)應用(yòng)或需要快速方法時使用(yòng)。細胞培養富集後NAT方法适合于待檢樣品與指示細胞共培養一段時間後，從細胞和上清中(zhōng)提取核酸，再通過NAT檢測。

中(zhōng)國(guó)藥典3301指出主細胞庫、工(gōng)作(zuò)細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床治療用(yòng)細胞進行支原體(tǐ)檢查時，應同時進行培養法和指示細胞培養法（DNA染色法）。病毒類疫苗的病毒收獲液、原液采用(yòng)培養法檢查支原體(tǐ)；必要時，亦可(kě)采用(yòng)指示細胞培養法篩選培養基。也可(kě)采用(yòng)經國(guó)家藥品檢定機構認可(kě)的其他(tā)方法。

培養法

傳統的支原體(tǐ)檢測采用(yòng)培養法，是将待測樣品接種到合适的液體(tǐ)培養基繁殖，然後再接種到固體(tǐ)培養基中(zhōng)，培養一個月後觀察固體(tǐ)培養基中(zhōng)是否有(yǒu)“油煎蛋”菌落出現，如若有(yǒu)則證明該待測樣品被支原體(tǐ)污染。培養法是中(zhōng)國(guó)藥典收錄的方法，采用(yòng)此方法可(kě)獲得比較可(kě)靠的數據。但培養法耗時長(cháng)，且無法檢測到豬鼻支原體(tǐ)。

熒光染色法

熒光染色法是将樣品接種到專門的指示細胞中(zhōng)，培養一段時間後利用(yòng)DNA熒光染料（例如Hoechst 33258）進行染色，正常細胞核區(qū)見邊緣整齊清晰的熒光，胞質(zhì)區(qū)無熒光。支原體(tǐ)污染的細胞不僅在細胞核而且在細胞核外及細胞膜上均可(kě)見散在熒光。此方法同樣被中(zhōng)國(guó)藥典收錄，但是方法靈敏度低，重複性差，需要專門的指示細胞。

PCR法

PCR法則是通過設計相應的引物(wù)，利用(yòng)PCR儀擴增對應支原體(tǐ)的核酸序列，也可(kě)以在常規PCR基礎上加入熒光探針或相應的熒光染料來實現實時定量。此方法可(kě)實現快速檢測，通常隻需要3小(xiǎo)時，但是細胞培養液中(zhōng)的物(wù)質(zhì)會對PCR的擴增過程産(chǎn)生影響

酶活法

酶活法是通過檢測支原體(tǐ)特異性ATP合成相關酶的活性間接反映支原體(tǐ)的含量，此方法的優勢：

1）支原體(tǐ)識别率高，100多(duō)種支原體(tǐ)，隻有(yǒu)1種不能(néng)識别，而這種支原體(tǐ)幾乎不會出現在體(tǐ)外的細胞中(zhōng)；

2）可(kě)以判斷出細胞的狀态；

3）不會造成假陽性或者假陰性；

4）檢測周期短；

劣勢：樣品基質(zhì)中(zhōng)的物(wù)質(zhì)可(kě)能(néng)會影響ATP酶活性，從而影響檢測結果。

自從首次在細胞培養物(wù)中(zhōng)發現支原體(tǐ)污染以來，各國(guó)監管部門始終關注這一影響生物(wù)制品安(ān)全性的因素。各國(guó)藥典或指南中(zhōng)詳細描述了幾種支原體(tǐ)的檢測方法，但是随着生物(wù)制藥行業的快速發展和經典方法的不足，一些新(xīn)穎的方法也被作(zuò)為(wèi)替代或者補充方法廣泛使用(yòng)。不同的方法靈敏度參差不齊，當該方法用(yòng)于質(zhì)量放行時應被充分(fēn)的驗證。

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