單克隆抗體(tǐ)藥物(wù)的體(tǐ)外生物(wù)學(xué)活性檢測是對抗體(tǐ)類藥物(wù)有(yǒu)效成分(fēn)以及效價進行測定，是單抗藥物(wù)質(zhì)量控制中(zhōng)非常重要的一環，生物(wù)學(xué)活性檢測貫穿蛋白藥物(wù)整個生命周期，從早期靶點的發現，抗體(tǐ)的篩選，再過渡至CMC階段進行生産(chǎn)、臨床應用(yòng)，到最後上市，都會涉及生物(wù)活性的分(fēn)析。因此，選擇高效、快速、準确的生物(wù)活性測定方法是極其重要的。
下面我們以抗體(tǐ)藥物(wù)為(wèi)例，說明生物(wù)學(xué)活性方法主要包括哪些。
1）細胞增殖抑制法
MTT法
CCK-8法
刃天青法
ATP法
ATP發光法是利用(yòng)螢火蟲熒光素/熒光素酶與細胞内的ATP發生氧化反應而産(chǎn)生光子，通過檢測光度來得到ATP含量，從而分(fēn)析細胞活性與增殖情況。具(jù)有(yǒu)靈敏度高、操作(zuò)便捷等優點。
報告基因法是通過重組抗體(tǐ)與相應靶點結合後，測定信号通路變化效應的活性評價方式。一般在細胞株難于獲得，以及殺傷中(zhōng)和或增殖抑制法産(chǎn)生量效曲線(xiàn)的信噪比不理(lǐ)想時，可(kě)基于對該通路的現有(yǒu)了解，将攜帶抗體(tǐ)作(zuò)用(yòng)靶點反應元件與報告基因的質(zhì)粒穩定轉染細胞後，通過重組抗體(tǐ)與相應靶點的作(zuò)用(yòng)，啓動報告基因的表達來檢測重組抗體(tǐ)的生物(wù)學(xué)活性。
單抗類藥物(wù)的ADCC活性檢測的傳統方法是外周血單核細胞（PBMC）或自然殺傷細胞（NK）對靶細胞的殺傷實驗，這種方法細胞分(fēn)離難度大、實驗操作(zuò)複雜并且變異性大。近年來國(guó)内外建立了基于報告基因法的ADCC活性檢測方法，完善了此類藥物(wù)的活性檢測方法。
除了檢測抗體(tǐ)對細胞的增殖和毒性作(zuò)用(yòng)外，還可(kě)以通過ELISA法測定靶細胞與抗體(tǐ)及刺激因子共培養後分(fēn)泌的細胞因子來評價抗體(tǐ)的生物(wù)學(xué)活性。例如抗IL-17單抗可(kě)以根據其抑制IL-17誘導靶細胞釋放IL-6或GROα等細胞因子的能(néng)力來評價其生物(wù)學(xué)活性。将IL-17和IL-17單抗以及靶細胞接種到96孔闆上，培養過夜。再通過ELISA法定量測定細胞上清液中(zhōng)分(fēn)泌的細胞因子的含量，細胞因子的含量與抗體(tǐ)活性成反比。
基于SPR的BIA法測定周期短；樣品消耗量低，一般僅有(yǒu)微克級；另外，無需預先标記熒光、二抗的分(fēn)子，避免了标記基團對分(fēn)子構象的影響，從而反映出分(fēn)子間真實的結合性質(zhì)；該技(jì )術除了獲取一般的親和力信息外，還能(néng)夠給出對闡述分(fēn)子間結合機理(lǐ)更為(wèi)寶貴的動力學(xué)信息。SPR 技(jì )術已廣泛應用(yòng)于小(xiǎo)分(fēn)子制藥和生物(wù)制藥領域，在抗體(tǐ)分(fēn)析領域，其應用(yòng)主要包括：
随着技(jì )術的進步，藥物(wù)體(tǐ)外生物(wù)學(xué)活性檢測手段越來越多(duō)，比如均相時間分(fēn)辨熒光、Alpha技(jì )術、熒光染料标記法等。一種藥物(wù)往往可(kě)通過多(duō)種方法進行體(tǐ)外活性的測定，例如：以VEGF或VEGFR2為(wèi)靶點的單抗類藥物(wù)的生物(wù)活性測定方法包括增殖抑制法和報告基因法。一種被廣泛應用(yòng)的方法是人臍靜脈内皮細胞（Human umbilical vein endothelial cell,）增殖抑制法，但是這種方法變異性大，重複性差。一種基于VEGF的主要作(zuò)用(yòng)機理(lǐ)VEGF-VEGFR-NFAT途徑的報告基因法，該方法通過檢測熒光素酶化學(xué)發光信号對其生物(wù)學(xué)活性進行檢測，可(kě)以作(zuò)為(wèi)HUVEC增殖抑制法的可(kě)行補充方法，并用(yòng)于其它種類的抗VEGF抗體(tǐ)的效力測定。
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