背景:
岩藻糖是許多(duō)寡糖(O或N-連)和多(duō)糖結構以及糖蛋白和糖脂的重要組成部分(fēn),它們通常與各種生物(wù)事件有(yǒu)關,包括受精(jīng)、胚胎發生、細胞凋亡、信号轉導和疾病進展,如類風濕性關節炎、炎症、癌症及囊性纖維化。糖綴合物(wù)的去岩藻糖基化是了解糖綴合物(wù)生物(wù)學(xué)效應的重要過程。
α1-2岩藻糖苷酶是一種高度特異性的外糖苷酶,它催化從低聚糖中(zhōng)水解線(xiàn)性α1-2連接的l -岩藻糖基(線(xiàn)性底物(wù)被定義為(wèi)相鄰的殘基上沒有(yǒu)分(fēn)支)。
Rhinogen® α1-2 Fucosidase是利用(yòng)大腸杆菌系統表達并經過多(duō)步層析純化得到的重組糖苷酶,分(fēn)子量大小(xiǎo)約為(wèi)97.7kD。中(zhōng)性條件具(jù)有(yǒu)活性,在37℃下獲得最佳反應活性。根據消化底物(wù)不同可(kě)适當延長(cháng)反應時間。
産(chǎn)品包裝(zhuāng):
Rhinogen® α1-2 Fucosidase(α 1-2岩藻糖苷酶)包裝(zhuāng)規格如下:
目錄号 |
規格 |
濃度 |
QPF-013-A |
1000units |
2000units/ml |
配套試劑:
Rhinogen® α1-2 Fucosidase(α 1-2岩藻糖苷酶)配套提供的試劑如下:
目錄号 |
試劑 |
成分(fēn) |
EB10 |
10×Glyco緩沖液3 |
200mM Tris,pH6.8 |
産(chǎn)品來源:
序列來源于Bifidobacterium bifidum,重組表達于E. coli,理(lǐ)論分(fēn)子量約97.7KD,C端帶6×His标簽。
産(chǎn)品質(zhì)量:
SDS-PAGE分(fēn)析,純度≥95%;沒有(yǒu)檢測到污染的外切糖苷酶、糖苷内切酶及蛋白酶活性。
産(chǎn)品特性:
α1-2 岩藻糖苷酶是一種高度特異性的外切糖苷酶,可(kě)催化水解糖蛋白或遊離寡糖上α1-2 連接的岩藻糖。
酶活定義:
在 20 mM Tris pH 6.8 中(zhōng)在 37℃下孵育 30 分(fēn)鍾,一個單位的 Rhinogen® α 1-2 Fucosidase可(kě)從≥90% 的 11 nmol 2'-fucosyllactose中(zhōng)水解岩藻糖。
保藏條件:
1. 采用(yòng)冰袋運輸, 收到産(chǎn)品後請立即将酶置于-20℃;配套試劑置于-20℃儲存。
2. 本品不含防腐劑,務(wù)必确保無菌操作(zuò)取用(yòng),避免污染。
應用(yòng):
1. 聚糖結構分(fēn)析;
2. 治療性重組蛋白的表征及質(zhì)量控制;
3. 消除糖蛋白的異質(zhì)性。
特性:
Rhinogen® α1-2 Fucosidase是一種高度純化和非常穩定的外切糖苷酶,具(jù)有(yǒu)穩定性高、與下遊檢測兼容等特點。
1. 高純度:沒有(yǒu)污染蛋白酶/其它糖苷酶,純度≥95%;
2. 高穩定性:每批産(chǎn)品都經過嚴格的質(zhì)量控制,以實現産(chǎn)品批間穩定性;
3. 與下遊 HPLC、質(zhì)譜兼容:不含甘油,酶切體(tǐ)系與 HPLC 及質(zhì)譜工(gōng)作(zuò)流程環境兼容。
推薦使用(yòng)方法:
1. 取1µg糖蛋白或者100nM寡糖樣品,加純化水至反應體(tǐ)系為(wèi)9μl;
2. 加入1µl 10×Glyco緩沖液3;
3. 加入1-2 µl Rhinogen® α1-2 Fucosidase,輕柔混勻;
4. 37°C 條件下反應1小(xiǎo)時。
注意:根據底物(wù)類型适當優化酶的濃度和孵育時間。
操作(zuò)說明:
1. 對于不同的糖蛋白樣品,需要實驗摸索最适的酶濃度及反應時間;
2. 反應可(kě)以線(xiàn)性放大或縮小(xiǎo);
3. 對于不同的糖蛋白樣品,所需酶量需要進行适當優化或根據經驗确定最優的操作(zuò)方法。在10~25μl反應體(tǐ)系中(zhōng),對于1μg糖蛋白建議初始酶量1~2μl,反應1小(xiǎo)時,如果沒有(yǒu)完全消化,建議過夜處理(lǐ)。
注意事項:
本産(chǎn)品僅供研究使用(yòng),不适用(yòng)于人或動物(wù)的診斷及治療用(yòng)途。