背景：

       在生産(chǎn)O-糖基化生物(wù)藥物(wù)的過程中(zhōng)，由于核心GalNAc殘基的不完全加工(gōng)，可(kě)能(néng)會出現Tn抗原（GalNAc以α連接的方式鏈接在絲氨酸/蘇氨酸上），有(yǒu)研究指出，Tn抗原可(kě)參與C型凝集素巨噬細胞半乳糖凝集素（MGL）結合，且MGL在樹突細胞和巨噬細胞中(zhōng)表達，因此Tn抗原與MGL的鏈接可(kě)能(néng)引起免疫抑制，幫助腫瘤實現免疫逃逸。

       α-N-乙酰半乳糖苷酶是一種高度特異性的外糖苷酶，可(kě)有(yǒu)效水解與糖蛋白（Tn抗原）中(zhōng)絲氨酸或蘇氨酸殘基連接的α-N-乙酰半乳糖胺（GalNAc），該酶還對α1-3連接的末端GalNAcs顯示活性。因此α-N-乙酰半乳糖苷酶可(kě)用(yòng)于去除Tn抗原。

産(chǎn)品包裝(zhuāng)：

       Rhinogen^® α-N-乙酰半乳糖苷酶包裝(zhuāng)規格如下：

配套試劑：

       Rhinogen^®α-N-乙酰半乳糖苷酶提供的試劑如下：

       序列來源于Akkermansia muciniphila，重組表達于E. coli，理(lǐ)論分(fēn)子量約52KD，C端帶6×His标簽。

産(chǎn)品質(zhì)量：

       SDS-PAGE分(fēn)析，純度≥95%；沒有(yǒu)檢測到污染的外切糖苷酶、糖苷内切酶及蛋白酶活性。

産(chǎn)品特性：

       α-N-乙酰半乳糖苷酶（α-N-Acetylgalactosaminidas，exo-α-N-Acetylgalactosaminidase，α-NAGA，EC3.2.1.49）是一種高度特異性的糖苷外切酶，可(kě)有(yǒu)效水解與糖蛋白中(zhōng)絲氨酸或蘇氨酸殘基連接的α-N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）（Tn抗原），該酶還對α 1-3連接的末端GalNAc顯示活性。α-NAGA在天然條件下水解糖蛋白上的GalNAc。适用(yòng)pH值範圍6.0到7.6，不需要輔助因子或特殊緩沖體(tǐ)系。

酶活定義：

       α-N-乙酰半乳糖苷酶能(néng)從4-Nitrophenyl N-acetyl-alpha -D-galactosaminide中(zhōng)裂解α-N-乙酰基半乳糖胺基，通過402nm檢測釋放PNP的量來定義酶活，在所述條件下（20mM Tris，pH6.8）每個活力單位每分(fēn)鍾能(néng)釋放≥600pmol PNP。

保藏條件：

       1. 采用(yòng)冰袋運輸， 長(cháng)期儲存請置于-20℃，重懸後2-8℃可(kě)保存1個月。
       2. 避免反複多(duō)次凍融和頻繁的溫度變化。

應用(yòng)：

       1.從糖肽及糖蛋白上釋放完整的Tn抗原；
       2.對 O-糖基化生物(wù)藥物(wù)進行 Tn 抗原表征；
       3.表征蛋白質(zhì)是否糖基化及去糖基化；
       4.糖蛋白測序及分(fēn)析；
       5.糖蛋白重組表達。

特性：

       α-N-乙酰半乳糖苷酶在生理(lǐ)緩沖液和中(zhōng)性pH值中(zhōng)具(jù)有(yǒu)活性，使其與大多(duō)數樣品兼容。此外，α-N-乙酰半乳糖苷酶的活性不依賴于可(kě)能(néng)損害LC-MS分(fēn)析的任何輔助因子，例如BSA。根據糖蛋白底物(wù)的性質(zhì)，孵育時間為(wèi)2~18h。

實驗準備：

       使用(yòng)反應緩沖液中(zhōng)将糖蛋白底物(wù)調整至0.5-5.0mg/ml。

糖蛋白消化：

       以2000U/支産(chǎn)品為(wèi)例：
       1、使用(yòng)100μl ddH2O重懸凍幹粉至20U/μl；
       2、以1U α-N-乙酰半乳糖苷酶/1μg糖蛋白的比例添加α-N-乙酰半乳糖苷酶；
       3 、37℃孵育2-18h。
       注意：根據底物(wù)類型适當優化酶的濃度和孵育時間。

注意事項：