背景：

       β1-4 Galactosidase是一類重要的糖基化研究的工(gōng)具(jù)酶。Rhinogen^® β1-4 Galactosidase是将來源于Streptococcus pneumoniae的β1-4 Galactosidase 基因重組并表達于大腸杆菌BL21中(zhōng)的重組酶，能(néng)夠催化寡糖或者糖蛋白非還原末端的β1-4連接的半乳糖殘基的水解，如圖1 所示。

圖1 β1-4 Galactosidase的酶切位點

包裝(zhuāng)規格：

       Rhinogen^® β1-4 Galactosidase包裝(zhuāng)規格如下：

儲存體(tǐ)系：

       QPF-006儲存在緩沖液中(zhōng)，以液體(tǐ)的形式提供。緩沖液的組成為(wèi)：50 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA (pH 7.5, 25°C)。

配套試劑：

       Rhinogen^® β1-4 Galactosidase提供的配套試劑如下：

産(chǎn)品來源：

       Rhinogen^® β1-4 Galactosidase是一種将來源于Streptococcus pneumoniae的β1-4 Galactosidase基因重組并表達于大腸杆菌BL21中(zhōng)的重組酶，分(fēn)子量大小(xiǎo)約為(wèi)94KD。

産(chǎn)品質(zhì)量：

       SDS-PAGE分(fēn)析，純度≥95%；沒有(yǒu)檢測到污染的糖苷外切酶、糖苷内切酶及蛋白酶的活性。

産(chǎn)品特性：

       最适反應pH為(wèi)6.0。失活條件：65°C處理(lǐ)10 min。

酶活定義：

       1個酶活力單位定義：在37°C，pH5.5條件下，1分(fēn)鍾内催化水解1 μmol 鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷所需要的酶量。

       1U Rhinogen^® β1-4 Galactosidase =1 U Prozyme Glyko^® β(1-4)-Galactosidase。不同公(gōng)司産(chǎn)品的酶活力單位換算，請參考活力單位轉換表，如下：

應用(yòng)：

1. 聚糖結構分(fēn)析；

2. 治療性重組蛋白的表征及質(zhì)量控制；

3. 消除糖蛋白的異質(zhì)性。

使用(yòng)建議：

1. 取1µg糖蛋白或者100nM寡糖樣品，加純化水至反應體(tǐ)系為(wèi)9μl；

2. 加入1µl 10×Glyco緩沖液1；

3. 加入1µl Rhinogen^® β1-4 Galactosidase，輕柔混勻；

4. 37°C 條件下反應1小(xiǎo)時。 

操作(zuò)說明：

1. 反應體(tǐ)系可(kě)以線(xiàn)性放大或縮小(xiǎo)；

2. 對于不同的糖蛋白樣品，需要進行适當優化或根據經驗确定最優的操作(zuò)方法。在10-25μl反應體(tǐ)系中(zhōng)，對于1μg糖蛋白建議初始酶量1-2μl反應1小(xiǎo)時，如果沒有(yǒu)完全消化，建議過夜處理(lǐ)；

3. pNP- βGal是有(yǒu)效的陽性對照底物(wù)。

4. 如果天然及脫半乳糖殘基的糖蛋白分(fēn)子大小(xiǎo)在凝膠上的差異足以進行區(qū)分(fēn)，則SDS-PAGE可(kě)以用(yòng)來評估糖蛋白糖基化程度及去糖基化程度；

5. 如果要對β1-4 Galactosidase切割後的聚糖進行分(fēn)離回收，糖蛋白的底物(wù)濃度應約為(wèi)10-20μM，适當延長(cháng)反應時間；

6. 本産(chǎn)品僅供研究使用(yòng)，不适用(yòng)于人或動物(wù)的診斷及治療用(yòng)途。