Rhinogen® α2-3,6,8,9 Neuraminidase産(chǎn)品具(jù)有(yǒu)穩定性高、比活性高等特點,是一種高度純化和非常穩定的外切糖苷酶,适用(yòng)于蛋白質(zhì)組學(xué)及糖生物(wù)學(xué)研究中(zhōng)糖蛋白上所有(yǒu)非還原末端的唾液酸殘基有(yǒu)效釋放。
高純度:沒有(yǒu)污染蛋白酶/其它糖苷酶,純度≥95%;
高穩定性:每批α2-3,6,8,9 Neuraminidase産(chǎn)品都經過嚴格的質(zhì)量控制,以實現高穩定性;
高比活性:有(yǒu)效和完全的釋放所有(yǒu)非還原末端的唾液酸殘基。
背景:
N-糖基化及O-糖基化是兩種主要的糖基化修飾形式,N-連聚糖以三甘露五糖核心與蛋白質(zhì)上的天冬酰胺(Asn)殘基的酰胺側鏈相連,而O-連聚糖以Core 1或Core 3的二糖核心與Ser或Thr殘基的羟基側鏈相連。這些N-或O-聚糖鏈上的末端殘基通常都是唾液酸,對糖蛋白的糖基化研究必不可(kě)少的第一步通常都是除去所有(yǒu)非還原末端的唾液酸殘基。來源于Arthrobacter ureafaciens的α2-3,6,8,9 Neuraminidase能(néng)夠釋放糖蛋白,糖脂,神經節苷脂及多(duō)糖上所有(yǒu)直鏈或支鏈非還原末端的唾液酸殘基。是一類重要的糖基化研究的工(gōng)具(jù)酶,廣泛用(yòng)于糖蛋白和糖脂的分(fēn)析。
Rhinogen®α2-3,6,8,9 Neuraminidase是一種将來源于Arthrobacter ureafaciens的α2-3,6,8,9 Neuraminidase 基因重組并表達于大腸杆菌BL21中(zhōng)的重組酶。在無糖苷酶本底表達的大腸杆菌宿主中(zhōng)表達的重組α2-3,6,8,9 Neuraminidase是高度純化的酶制劑,能(néng)夠釋放α (2,3)-, α (2,6)-, α (2,8)-, α (2,9)-唾液酸殘基,如圖1,不同唾液酸殘基的釋放速率大緻為(wèi)α (2,6)->α (2,3)- >α (2,8)- >α (2,9)-,通過加入足夠的酶,釋放的速率差異并不影響它在實際應用(yòng)中(zhōng)的完全非特異性去除唾液酸殘基的性質(zhì)。
圖1. Rhinogen® α2-3,6,8,9 Neuraminidase作(zuò)用(yòng)位點
産(chǎn)品包裝(zhuāng):
Rhinogen® α2-3,6,8,9 Neuraminidase包裝(zhuāng)規格如下:
目錄号 |
規格 |
濃度 |
QPF-005-A |
0.6U/30μl |
20U/ml |
QPF-005-B |
5×0.6U/30μl |
20U/ml |
儲存體(tǐ)系:
QPF-005儲存在緩沖液中(zhōng),以液體(tǐ)的形式提供。緩沖液的組成為(wèi):50 mM NaCl,20 mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25°C),1 mM EDTA。
配套試劑:
Rhinogen® α2-3,6,8,9 Neuraminidase 提供的配套試劑如下:
試劑 |
成分(fēn) |
規格 |
10×Glyco緩沖液1 |
50 mM CaCl2、500 mM sodium acetate, pH 5.5 at 25°C |
1ml |
産(chǎn)品來源:
Rhinogen® α2-3,6,8,9 Neuraminidase 是一種将來源于Arthrobacter ureafaciens 的α2-3,6,8,9 Neuraminidase基因重組并表達于大腸杆菌BL21中(zhōng)的重組酶,分(fēn)子量大小(xiǎo)為(wèi)66KD。
産(chǎn)品質(zhì)量:
SDS-PAGE分(fēn)析,純度≥95%;沒有(yǒu)檢測到污染的外切糖苷酶、内切糖苷酶及蛋白酶活性。
産(chǎn)品特性:
反應适宜pH範圍:4.5-7,最适反應pH:5.5;熱失活條件:65°C處理(lǐ)10 min。
酶活定義:
1個酶活力單位定義:在37°C,pH5.5條件下,以對硝基苯基-α-D-N-乙酰神經氨酸為(wèi)底物(wù),1分(fēn)鍾内催化釋放1 μmol 對硝基苯酚所需要的酶量。
1U Rhinogen® α2-3,6,8,9 Neuraminidase =1 U Prozyme Glyko® Sialidase ATM。不同公(gōng)司産(chǎn)品的酶活力單位換算,請參考活力單位轉換表,如下:
Enzyme |
Company |
Selling Conc. (U/ml) |
Units /Vial |
µl/ Vial |
Rhinogen® Assay (U/ml) |
Rhinogen® Assay Units /Vial |
µl Conversion (1 Rhinogen® µl = x Company µls) |
α2-3,6,8,9 Neuraminidase |
Rhinogen® (QPF-005) |
20 |
0.6 |
30 |
20 |
0.6 |
1 |
NEB (NEB #P0722) |
20,000 |
800 |
40 |
20 |
0.8 |
1 |
|
NEB (NEB #P0720) |
50,000 |
2,000 |
40 |
50 |
2 |
0.4 |
|
Prozyme (GKX-5021)α2-3, 6, 8 Neur) |
5 |
1 |
200 |
10 |
2 |
2 |
|
Prozyme (GK80040, α2-3,6,8,9 Neur) |
5 |
1 |
200 |
5 |
1 |
4 |
儲存條件:
-20℃條件下,避免反複凍融。
産(chǎn)品特點:
Rhinogen® 提供的α2-3,6,8,9 Neuraminidase産(chǎn)品具(jù)有(yǒu)穩定性高、比活性高等特點,是一種高度純化和非常穩定的外切糖苷酶,适用(yòng)于蛋白質(zhì)組學(xué)及糖生物(wù)學(xué)研究中(zhōng)糖蛋白上所有(yǒu)非還原末端的唾液酸殘基有(yǒu)效釋放。
1. 高純度:沒有(yǒu)污染蛋白酶/其它糖苷酶,純度≥95%;
2. 高穩定性:每批α2-3,6,8,9 Neuraminidase産(chǎn)品都經過嚴格的質(zhì)量控制,以實現高穩定性;
3. 高比活性:有(yǒu)效和完全的釋放所有(yǒu)非還原末端的唾液酸殘基。
應用(yòng):
1. 聚糖結構分(fēn)析;
2. 涉及唾液酸的病理(lǐ)生理(lǐ)學(xué)研究;
3. 治療性重組蛋白的表征及質(zhì)量控制;
4. 癌症研究及異常唾液酸化的鑒定及體(tǐ)外診斷;
5. 消除糖蛋白的異質(zhì)性。
唾液酸酶有(yǒu)很(hěn)多(duō)種,Rhinogen® 的唾液酸酶跟市面上的有(yǒu)什麽區(qū)别?
市面上常見的唾液酸酶有(yǒu)α2-3、 α2-3, 6-、α2-3,6,8-及 α2-3,6,8,9-等4種:
1) α2-3Neuraminidase基因常常來源于Salmonella typhimurium LT2、Streptococcus pneumoniae及Pasteurella multocida,能(néng)夠切割釋放α2-3連唾液酸殘基;
2) α2-3, 6 Neuraminidase基因常常來源于Clostridium perfringens,能(néng)夠切割釋放α2-3, α2-6 連唾液酸殘基;
3) α2-3,6,8 Neuraminidase能(néng)夠切割釋放α2-3, α2-6 , α2-8 連唾液酸殘基;
4) α2-3,6,8,9 Neuraminidase 基因常常來源于Arthrobacter ureafaciens, 能(néng)夠切割釋放α2-3, α2-6 , α2-8, α2-9連唾液酸殘基,它還可(kě)以切割與内部殘基連接的支鏈唾液酸殘基,Rhinogon®目前隻有(yǒu)這一種唾液酸酶,是一種應用(yòng)最廣泛、适用(yòng)性更廣的酶。
α2-3,6,8,9 Neuraminidase有(yǒu)效的陽性對照底物(wù)?
Fetuin或 pNP-N-乙酰神經氨酸是α2-3,6,8,9 Neuraminidase的有(yǒu)效陽性對照底物(wù)。
α2-3,6,8,9 Neuraminidase可(kě)以同時與其他(tā)外切糖苷酶和/或内切糖苷酶進行雙重消化嗎?
是的,可(kě)以同時使用(yòng)。 與其它外切糖苷酶同時使用(yòng)時,建議采用(yòng)1× Glyco緩沖液 1(50mM乙酸鈉, 5mM CaCl 2,pH5.5)緩沖體(tǐ)系; 與PNGase F和/或O-Glycosidase同時使用(yòng)時,建議使用(yòng)1×Glyco緩沖液 2(50 mM磷酸鈉,pH 7.5)。
Neuraminidase對糖蛋白樣品的去唾液酸化是否要求變性條件?
不需要,通常去糖基化的酶都可(kě)以從天然(折疊)糖蛋白上去除聚糖殘基,然而由于空間位阻效應(蛋白質(zhì)的二級或三級結構),聚糖位點周圍的蛋白質(zhì)可(kě)能(néng)會影響一些酶的可(kě)及性,對于PNGase F 及O-Glycosidase,變性條件下去糖基化效率會得到較大的提高,但是對于Neuraminidase,變性及天然狀态下,去唾液酸的效率相差不大。
Rhinogen® α2-3,6,8,9 Neuraminidase是否可(kě)以切割釋放N-乙酰神經氨酸(Neu5Ac)和N-羟乙酰神經氨酸(Neu5Gc)殘基?
Rhinogen® α2-3,6,8,9 Neuraminidase既可(kě)以切割Neu5Ac,又(yòu)可(kě)以切割Neu5Gc,但相對Neu5Ac,其對Neu5Gc具(jù)有(yǒu)稍低的切割效率。