背景：

       來源于Streptococcus Pneumoniae（或Enterococcus Faecalis）的O-糖苷酶（O-Glycosidase，EC 3.2.1.97）是一類重要的糖基化研究的工(gōng)具(jù)酶。Rhinogen^®  O-Glycosidase是将來源于Enterococcus Faecalis的O-Glycosidase基因重組并表達于大腸杆菌BL21中(zhōng)的重組酶，能(néng)夠将糖蛋白中(zhōng)Ser或Thr殘基的羟基連接的Core 1（Gal-β(1-3)-GalNAc-）及Core 3（GlcNAc-β(1-3)-GalNAc-）O-連雙糖釋放下來，如圖1。該酶對α-GalNAc結合是特異性的，但對于Ser或Thr殘基沒有(yǒu)明顯的偏好，同時糖蛋白的變性與否也不顯着影響O-去糖基化的效率。核心結構的任何修飾都可(kě)以阻斷O-Glycosidase的作(zuò)用(yòng)，最常見的修飾是核心結構的單、二或三唾液酸化。除此以外，核心結構還可(kě)能(néng)被岩藻糖，N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺殘基進一步取代修飾，核心結構以外的單糖必須通過一系列外切糖苷酶依次切割，直到僅保留Core 1或Core 3二糖核心。然後O-Glycosidase才能(néng)夠完整的從Ser或Thr殘基上釋放二糖核心，如圖2。通常O-Glycosidase的使用(yòng)都需要配合唾液酸酶。

 圖1 Rhinogen^® O-Glycosidase作(zuò)用(yòng)O-連二糖核心的類型

圖2  複雜O-聚糖結構的糖鏈釋放

産(chǎn)品包裝(zhuāng)：

       Rhinogen^® O-Glycosidase包裝(zhuāng)規格如下：

儲存體(tǐ)系：

       QPF-004儲存在緩沖液中(zhōng)，以液體(tǐ)的形式提供。緩沖液的組成為(wèi)：50 mM NaCl，20 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5。

配套試劑：

       Rhinogen^® O-Glycosidase 配套提供的試劑如下：

産(chǎn)品來源：

       Rhinogen^® O-Glycosidase是一種将來源于Enterococcus Faecalis的O-Glycosidase基因重組并表達于大腸杆菌BL21中(zhōng)的重組酶，分(fēn)子量大小(xiǎo)約為(wèi)147kDa。

産(chǎn)品質(zhì)量：

       SDS-PAGE分(fēn)析，純度≥95%；沒有(yǒu)檢測到污染的外切糖苷酶、糖苷内切酶及蛋白酶活性。 

産(chǎn)品特性：

       最适反應pH為(wèi)7.5；熱失活條件：65°C處理(lǐ)10 min。 

酶活定義：

       1個酶活力單位定義：在100 μl反應體(tǐ)系中(zhōng)，37°C，pH7.5條件下，1小(xiǎo)時内從5mg唾液酸酶消化後的非變性fetuin 上催化釋放0.68nmol O-連二糖所需要的酶量。

       1U Rhinogen^® O-Glycosidase =1 unit NEB O-Glycosidase。 

儲存條件：

       -20℃條件下，避免反複凍融。 

應   用(yòng)：

       1.O-聚糖結構分(fēn)析；

       2.糖蛋白生物(wù)合成分(fēn)析；

       3.涉及O-聚糖的病理(lǐ)生理(lǐ)學(xué)研究；

       4.治療性重組蛋白的表征及質(zhì)量控制；

       5.癌症研究和異常O-糖基化的鑒定及體(tǐ)外診斷。