背景：

       科(kē)學(xué)研究表明，人體(tǐ)中(zhōng)存在的蛋白質(zhì)超過50%是以糖蛋白的形式存在。蛋白質(zhì)糖基化作(zuò)為(wèi)生物(wù)體(tǐ)内最重要的蛋白質(zhì)翻譯後修飾形式之一，具(jù)有(yǒu)重要的生物(wù)學(xué)功能(néng)，不僅影響蛋白質(zhì)的空間構象、生物(wù)活性、運輸及定位等，而且還參與分(fēn)子識别、細胞通信、細胞分(fēn)化、信号轉導、免疫應答(dá)等等在内的各種重要生命活動。在多(duō)種疾病，如腫瘤（FDA已批準的用(yòng)于癌症疾病診斷和監控的生物(wù)标志(zhì)物(wù)中(zhōng)大部分(fēn)是糖蛋白）、神經退行性疾病、心血管病、代謝(xiè)性疾病、免疫性疾病及感染性疾病的發生發展中(zhōng)均伴随着蛋白質(zhì)糖基化程度及糖鏈結構異常的發生。此外，糖基化還顯著影響生物(wù)治療劑的生物(wù)活性、靶标、運輸、血清半衰期、清除率及受體(tǐ)識别等性質(zhì)。例如，重組促紅細胞生成素的藥代動力學(xué)和效力受其糖基化狀态的嚴重影響，而單克隆抗體(tǐ)通過ADCC介導功效的能(néng)力受Fc區(qū)岩藻糖含量的影響，因此蛋白質(zhì)糖基化研究是繼核酸、蛋白質(zhì)之後生命科(kē)學(xué)中(zhōng)又(yòu)一極具(jù)潛力的研究領域，具(jù)有(yǒu)重要理(lǐ)論及應用(yòng)意義。FDA要求所有(yǒu)類型的糖蛋白都需要進行糖型分(fēn)析。

       來源于Flavobacterium meningsepticum 的肽N-糖苷酶F（PNGase F，EC 3.5.1.52）是從糖蛋白中(zhōng)特異性除去N-連聚糖的糖苷内切酶，是一類重要的糖基化研究的工(gōng)具(jù)酶，被廣泛用(yòng)于治療性蛋白質(zhì)上N-連糖鏈位點、結構信息及功能(néng)關系的研究。Rhinogen^® PNGase F（Glycerol-free）是表達于大腸杆菌 BL21中(zhōng)的重組PNGase F，能(néng)夠将絕大多(duō)數N-糖鏈（除含α-1,3連接的核心岩藻糖，常見于植物(wù)及昆蟲糖蛋白）完整地從其所連接的蛋白分(fēn)子上釋放下來，可(kě)以在 N-連糖肽或糖蛋白的高甘露糖、雜合和複雜寡糖部分(fēn)最内側的 N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基（Asn）之間進行切割，釋放出完整的寡糖鏈，如圖1A。在釋放糖鏈的同時将氨基酸特征序列上的天冬酰胺殘基轉化為(wèi)天冬氨酸殘基，其賦予蛋白質(zhì)+ 1Da質(zhì)量變化，如圖1B。它對多(duō)種底物(wù)具(jù)有(yǒu)高度活性，包括純化的糖蛋白和人血清糖蛋白的複合混合物(wù)。此外，由于不含甘油，在非變性條件下，酶與HPLC及質(zhì)譜工(gōng)作(zuò)流程環境兼容。連接到N-連寡糖的磷酸鹽，硫酸鹽和唾液酸基團不影響N-糖鏈的釋放。

圖1A. PNGase F特異性切割位點；圖1B. PNGase F釋放糖鏈的反應機制

産(chǎn)品包裝(zhuāng)：

       Rhinogen^® PNGase F（Glycerol-free）包裝(zhuāng)規格如下：

儲存體(tǐ)系：

       QPF-001儲存在緩沖液中(zhōng)，以液體(tǐ)的形式提供。緩沖液的組成為(wèi)：50 mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25°C)，5 mM EDTA ，本品不含甘油，與下遊HPLC、MS分(fēn)析兼容。

配套試劑：

産(chǎn)品來源：

       Rhinogen^® PNGase F（Glycerol-free）是一種将來源于Flavobacterium meningsepticum 的PNGase F基因重組到pET28aT7啓動子下遊，并在大腸杆菌BL21中(zhōng)進行表達後分(fēn)離得到的重組糖苷酶，其分(fēn)子量大小(xiǎo)為(wèi)36KDa。

産(chǎn)品質(zhì)量：

       SDS-PAGE分(fēn)析，純度≥95%；沒有(yǒu)檢測到污染的外切糖苷酶、糖苷内切酶及蛋白酶活性。

産(chǎn)品特性：

       最适反應pH：7.5；熱失活條件：75°C處理(lǐ)10 min。

酶活定義：

       1個酶活力單位定義：在10 μl反應體(tǐ)系中(zhōng)，37°C，pH7.5條件下，1小(xiǎo)時内催化釋放10μg變性RNase B＞95%N-連寡糖所需要的酶量。

       1U Rhinogen^® PNGase F=1 unit NEB PNGase F。不同公(gōng)司産(chǎn)品的酶活力單位換算，請參考活力單位轉換表，如下： 

保藏條件：

       采用(yòng)冰袋運輸，收到産(chǎn)品後請立即将酶置于4℃，嚴禁凍存；配套試劑置于-20℃儲存。本品不含防腐劑，務(wù)必确保無菌操作(zuò)取用(yòng)，避免污染。 

應用(yòng)：

       1. 從糖肽及糖蛋白上釋放完整的N-連聚糖；

       2. 表征蛋白質(zhì)是否糖基化；

       3. 用(yòng)于分(fēn)子量檢測或晶體(tǐ)學(xué)研究時去糖基化蛋白質(zhì)的制備；

       4. N-糖基化糖蛋白的結構-功能(néng)研究；

       5. 糖基化位點的确定。