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Quick™ PNGase F-Plus

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  3. 價格
QPF-019-A
30T
詢價
QPF-019-B
5×30T
詢價

産(chǎn)品概述

背景:

       目前越來越多(duō)的抗體(tǐ)和抗體(tǐ)融合蛋白被用(yòng)作(zuò)生物(wù)治療劑,這些生物(wù)治療劑的性質(zhì)又(yòu)顯著受其糖基化狀态的影響。例如,重組促紅細胞生成素的藥代動力學(xué)和效力受其糖基化狀态的嚴重影響, IgG的Fc區(qū)Asn297處的保守N-連聚糖對其功能(néng)活性至關重要。此外,一些抗體(tǐ)還具(jù)有(yǒu)額外的N-連聚糖,如圖A,其與Fc區(qū)Asn297處的保守N-聚糖一起影響抗體(tǐ)的識别、半衰期和免疫應答(dá)反應。然而在細胞培養過程中(zhōng)的各種變量都可(kě)能(néng)會導緻抗體(tǐ)糖基化程度的改變及增加其聚糖多(duō)樣性,因此在生産(chǎn)過程中(zhōng)監測抗體(tǐ)的糖基化狀态對于獲得正确的糖蛋白形式至關重要。

      Rhinogen®提供的QuickTM PNGase F-Plus 是一種改進的重組試劑,具(jù)有(yǒu)快速高效及保留完整的去糖基化蛋白(非還原條件下)的特性,适用(yòng)于治療性單克隆抗體(tǐ)的開發和質(zhì)量控制過程中(zhōng)N-連糖鏈的分(fēn)析及蛋白質(zhì)組學(xué)分(fēn)析。快速處理(lǐ)時間降低了通過标準PNGase F長(cháng)時間酶促去糖基化反應方案可(kě)能(néng)引入的雜質(zhì)和不需要的蛋白質(zhì)修飾(氧化,脫酰胺)的風險。

産(chǎn)品包裝(zhuāng):

       Rhinogen® QuickTM PNGase F-Plus包裝(zhuāng)規格如下:

                 目錄号
           規格
             QPF-019-A
           30T
             QPF-019-B
           5*30T

産(chǎn)品來源: 

       Rhinogen® QuickTM PNGase F-Plus是由大腸杆菌表達得到的重組糖苷酶,分(fēn)子量大小(xiǎo)為(wèi)36kDa。

産(chǎn)品質(zhì)量:

       通過SDS-PAGE分(fēn)析,純度≥95%;沒有(yǒu)檢測到污染的外切糖苷酶、糖苷内切酶及蛋白酶活性。

産(chǎn)品特性:       

       熱失活條件:75℃處理(lǐ)10min。

産(chǎn)品特點:

       高 效:快速、無偏好釋放N-連聚糖;
       高 純 度:沒有(yǒu)污染蛋白酶/糖苷酶,純度≥95%;
       高适用(yòng)性:對多(duō)種結構抗體(tǐ)或糖蛋白有(yǒu)效;
       高穩定性:每批QuickTM PNGase F-Plus 産(chǎn)品都經過嚴格的質(zhì)量控制,以實現高
穩定性;
       保留完整二硫鍵:保留完整的去糖基化蛋白使得蛋白質(zhì)表征更方便,減少偏差
(非還原條件下)。

保藏條件:

       采用(yòng)冰袋運輸,收到産(chǎn)品後請立即将酶置于2-8℃條件下儲存,嚴禁凍存;配套試劑置于-20℃儲存,其中(zhōng)QuickTM 反應增強劑凍幹粉溶解後,-70℃可(kě)儲存一個月,2~8℃可(kě)儲存一周;酶液中(zhōng)不含防腐劑,務(wù)必确保無菌操作(zuò)取用(yòng),避免污染。

應用(yòng):

       1. 在數分(fēn)鍾内快速完成抗體(tǐ)或抗體(tǐ)融合蛋白的完全快速去糖基化;

       2. 抗體(tǐ)及抗體(tǐ)-融合蛋白生産(chǎn)過程中(zhōng)糖基化狀态監測;

       3. 抗體(tǐ)及抗體(tǐ)-融合蛋白生物(wù)治療劑的産(chǎn)品質(zhì)量控制;

       4. 蛋白質(zhì)組學(xué)應用(yòng)及研究。

操作(zuò)說明:

       本産(chǎn)品僅供研究使用(yòng),不适用(yòng)于人或動物(wù)的診斷及治療用(yòng)途。

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常見問題

Rhinogen® QuickTM PNGase F-Plus去糖基化後得到什麽産(chǎn)物(wù)?

利用(yòng)Rhinogen® QuickTM PNGase F-Plus進行抗體(tǐ)及抗體(tǐ)融合蛋白去糖基化後,會快速完全地釋放出所有(yǒu)N-連寡糖鏈,并在釋放糖鏈的同時将氨基酸特征序列上的天冬酰胺殘基轉化為(wèi)天冬氨酸殘基。


還原和非還原條件下的操作(zuò)方法有(yǒu)什麽區(qū)别?

還原條件下,能(néng)在數分(fēn)鍾内使抗體(tǐ)和相關的融合蛋白快速完全去糖基化,是治療性單克隆抗體(tǐ)的開發和質(zhì)量控制過程中(zhōng)下遊N-聚糖分(fēn)析和應用(yòng)的理(lǐ)想選擇。非還原條件下,能(néng)保持抗體(tǐ)二硫鍵的完整性,獲得完整去糖基化多(duō)聚體(tǐ)蛋白(即抗體(tǐ)),是質(zhì)譜研究去糖基化蛋白時的理(lǐ)想選擇。


Rhinogen® QuickTM PNGase F-Plus理(lǐ)想的對照底物(wù)是什麽?

抗MBP單克隆抗體(tǐ)是QuickTM PNGase F-Plus的良好對照底物(wù)。


如何檢測Rhinogen® QuickTM PNGase F-Plus在10分(fēn)鍾内是否完全去糖基化?

對于單克隆抗體(tǐ),在去除N-聚糖之後在SDS-PAGE上可(kě)以觀察到糖基化抗體(tǐ)與去糖基化抗體(tǐ)在凝膠上位置的變化。如果需要更精(jīng)确的檢測是否殘留少量的糖基化抗體(tǐ),可(kě)以采用(yòng)更敏感的測定(例如,LS-ESI-TOF)。


下遊HPLC及MS分(fēn)析是否與Rhinogen® QuickTM PNGase F-Plus兼容?

是的,制備液相色譜和/或質(zhì)譜的樣品,可(kě)以通過常規的固相萃取方法如C18和石墨化碳分(fēn)離N-聚糖;去糖基化蛋白通過微量透析或微過濾交換緩沖液後用(yòng)于質(zhì)譜分(fēn)析,當然您也可(kě)以在酸性條件下将QuickTM反應增強劑分(fēn)解成無幹擾的副産(chǎn)物(wù),不會抑制肽電(diàn)離。


蛋白酶抑制劑混合物(wù)可(kě)以用(yòng)于Rhinogen® QuickTM PNGase F-Plus反應嗎?
可(kě)以,如下蛋白酶抑制劑混合物(wù)與QuickTM PNGase F-Plus反應相容。

抑肽酶(10μg/ ml終濃度);苄脒(1mM終濃度);抑胃酶抑制素(10μg/ ml終濃度);亮抑酶肽(1μM終濃度);EGTA(1mM終濃度);EDTA(1mM終濃度)。


Rhinogen® QuickTM PNGase F-Plus反應與胰蛋白酶是否兼容?

是兼容的,可(kě)以将胰蛋白酶直接加入用(yòng)QuickTM PNGase F-Plus消化的樣品中(zhōng)。
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